不同制法馬錢子抗炎鎮(zhèn)痛作用討論論文
炎癥是機體對炎癥因子的損傷產(chǎn)生的一種以血管滲透為中心的積極防御反應(yīng)，是機體對損傷性刺激的保護性反應(yīng)，該過程會產(chǎn)生如組胺、前列腺素等致痛物質(zhì)，加重機體的疼痛與損傷。多年研究早已證實中藥制劑具有很好的抗炎鎮(zhèn)痛作用，且毒副作用小。馬紅丸是廣州市中醫(yī)醫(yī)院自上世紀70年代初就應(yīng)用于治療肝癌的特色中藥制劑。前期課題組采用反相高效液相色譜法測定了馬紅丸君藥馬錢子活性成分馬錢子堿的含量，并對馬錢子堿脂質(zhì)體不同給藥方式進行了藥動學(xué)考察。本實驗采用小鼠耳廓腫脹法、醋酸扭體法與小鼠熱水甩尾法對不同制法馬錢子的抗炎鎮(zhèn)痛作用進行比較，為馬錢子的減毒增效炮制工藝優(yōu)化提供理論依據(jù)。
1 材料
1. 1 藥材
生馬錢子購于廣州采芝林藥業(yè)有限公司，批號: YPA0J0001，經(jīng)廣東省生物制品與藥物研究所鐘世順副主任藥師鑒定為馬錢科植物馬錢Strychnos nux-vomica L. 的干燥成熟種子。1. 2 動物
SPF 級健康昆明小鼠264 只，雌雄各半，體重18 ～ 22 g，由廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供，實驗動物生產(chǎn)許可證號: SCXK( 粵) 2009-0002。
1. 3 試劑
阿司匹林腸溶片，河南天地藥業(yè)股份有限公司，批號: 140405; 乙醚和二甲苯，天津市富宇精細化工有限公司，批號分別為20131205 和20140210; 醋酸，天津市大茂化學(xué)試劑廠，批號:20140520; 食用油、白醋，廣州頂益食品有限責(zé)任公司; 粗河沙適量。
1. 4 儀器
AEL-160 型電子分析天平( 日本島津公司) ; 恒溫水浴鍋( 上海齊欣科學(xué)儀器有限公司) 。
2 方法
2. 1 實驗用藥的制備
2. 1. 1 馬錢子藥材的凈制:
將馬錢子置于草木灰的余火中不停翻動，烤至表面鼓起，取出，刮去茸毛，得馬錢子生品。
2. 1. 2 油馬錢子的制備:
市售麻油倒入鐵鍋中用溫程400 ℃溫度計距鍋底3 mm 處測溫，待溫度至235 ℃時投入生馬錢子，炸至老黃色為度，取出瀝盡油，晾冷。
2. 1. 3 砂馬錢子的制備:
取潔凈粗河沙加入鍋內(nèi)加熱，用溫程300 ℃溫度計距鍋底3 mm 測溫，待溫度至230 ℃時投入生馬錢子，掩埋30 s，不斷翻動3min，至鼓起爆裂并顯棕褐色或深棕色時迅速出鍋，晾涼。
2. 1. 4 醋馬錢子的制備:
取生馬錢子水浸2 d，潤12 h，作切片前的軟化處理，切成1. 5 mm 厚的薄片。每100 g 馬錢子加入20 mL 醋拌勻，待醋吸凈后即炒干，取出晾涼。
2. 1. 5 馬錢子水煎液的制備:
稱取馬錢子油炙品、砂制品和醋制品粗顆粒各50 g，分別用蒸餾水浸泡30 min，煎煮至沸后用文火煮30 min，攪拌，濾出煎液，藥渣再用適量蒸餾水煎煮20 min，濾出煎液，合并濾液，濃縮至生藥含量高劑量20 mg /kg，中劑量10 mg /kg，低劑量5 mg /kg。
2. 2 實驗方法
2. 2. 1 耳廓腫脹法:
取小鼠88 只，雌雄各半，隨機分為模型組( 生理鹽水組) ，阿司匹林組( 20 mg /kg) ，油馬錢子高、中、低劑量組，砂馬錢子高、中、低劑量組，醋馬錢子高、中、低劑量組，每組8 只，分別灌胃給藥，連續(xù)給藥2 w。于末次給藥后1 h，用乙醚輕度麻醉，在小鼠右耳兩側(cè)涂20 μL 二甲苯致炎，左耳不作任何處理，3h 后將小鼠脫頸椎處死，剪下兩耳，用直徑7 mm 的打孔器在對應(yīng)位置沖下左右耳廓，分別在電子天平稱重，計算腫脹度。腫脹度= 致炎耳片重- 非致炎耳片重。
2. 2. 2 扭體法:
取小鼠88 只，分組及給藥同“2. 2. 1”項下，各組小鼠在末次給藥后30 min 腹腔注射0. 5%的'醋酸溶液20 mL /kg，觀察并記錄注射醋酸溶液后15 min 內(nèi)出現(xiàn)扭體反應(yīng)次數(shù)，實驗完畢后，計算藥物鎮(zhèn)痛百分率。鎮(zhèn)痛率=對照組扭體次數(shù)- 給藥組扭體次數(shù)對照組扭體次數(shù)× 100%。
2. 2. 3 甩尾法: 取小鼠88 只，按“2. 2. 1”項下方法分組。小鼠禁食不禁水12 h，將小鼠尾端0. 5 cm 浸入57 ℃恒溫水浴鍋中，記錄鼠尾進入水面到回縮出水面的時間為甩尾潛伏期。各組小鼠用藥前測痛2次，每次間隔10 min，取平均值作為基礎(chǔ)痛閾值( 剔除小于1 s 及大于6 s 的個體) 。24 h 后取合格小鼠測定基礎(chǔ)潛伏期，然后按“2. 2. 1”項下方法分別灌胃給藥，測定并記錄各給藥組末次給藥后30、60、90、120 min 小鼠甩尾潛伏期變化。
2. 3 數(shù)據(jù)處理
用SPSS 17. 0 軟件進行統(tǒng)計分析，組間數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析( One-way ANOVA)，以P < 0. 05 表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義，所得數(shù)據(jù)以珋x ± s 表示。
3 結(jié)果
3. 1 對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響
除油馬錢子和砂馬錢子低劑量組外，其余各組給藥2 w 后對二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹均有不同程度的抑制作用，其中醋馬錢子中、高劑量作用最強。
3. 2 對醋酸腹腔刺激致小鼠扭體的影響
各組均對醋酸腹腔刺激所致的疼痛有顯著的抑制作用，尤以醋馬錢子高劑量組的鎮(zhèn)痛作用最強，鎮(zhèn)痛率為46. 2%。
3. 3 對小鼠熱水甩尾潛伏期的影響除油馬錢子低劑量組外，各組多能顯著延長小鼠甩尾潛伏期。與模型組比較，除油馬錢子及砂馬錢子低劑量組外，其余各組馬錢子制品不同劑量組在30 min 后均能延長小鼠甩尾潛伏期，而醋制馬錢子對其影響最大。
4 討論
馬錢子因大毒、安全范圍小，限制了臨床應(yīng)用，其中馬錢子堿和番木鱉堿可作用于脊髓，興奮脊髓的反射功能，引起感覺器官敏感，調(diào)節(jié)大腦皮層興奮和抑制過程，提高橫紋肌、平滑肌和心肌的張力，導(dǎo)致強直性驚厥，最后因呼吸麻痹而致死。適當(dāng)?shù)呐谥品绞娇裳杆倨茐鸟R錢子相關(guān)有毒物質(zhì)結(jié)構(gòu)，使其轉(zhuǎn)化成藥理作用相似但毒性降低的氮氧化物和異型生物堿。而含毒性馬錢子的中成藥制劑數(shù)量較少，且多為炮制后入丸散用。
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