生化實驗試題參考

生化實驗試題參考

　　篇一：生物化學實驗考試試題(完整版)

　　生物化學實驗

　　二、填空題：

　　1. 測定蛋白質含量的方法有(雙縮脲法)， (紫外吸收法)，( Folin-酚試劑法（或Lowry法） )和 （考馬斯亮

　　藍G-250染色法）。

　　2. CAT能把H2O2分解為H2O和O2，其活性大小以（以一定時間內分解的H2O2量）來表示，當CAT

　　與H2O2反應結束，再用 （碘量法） 測定未分解的H2O2。

　　3. 聚丙烯酰胺凝膠電泳是以 （聚丙烯酰胺凝膠） 作為載體的一種區帶電泳，這種凝膠是由（Acr） 和交聯劑（Bis） 在催化劑作用下聚合而成。化學聚合法一般用來制備（分離）膠，其自由基的引發劑是（Ap），催化劑是（TEMED） ；光聚合法適于制備大孔徑的（濃縮）膠，催化劑是（核黃素） 。

　　4.層析技術按分離過程所主要依據的物理化學性質進行分類，可分成以下幾種：（吸附層析），（分配層析 ），（離子交換層析），（凝膠層析 ）和 （親和層析） 。

　　5. 使用離心機離心樣品前，必須使離心管（等重）且對稱放入離心機。

　　6. 米氏常數可近似表示酶和底物親合力，Km愈小，表示E對S的親合力愈（大） ，Km愈大，表示E對S

　　的親合力愈（小） 。

　　7. 分光光度計在使用之前必須預熱，注意預熱及樣品槽空時必須__（打開）____（打開、合上）樣品池翻蓋。

　　8. CAT是植物體內重要的酶促防御系統之一，其活性高低與植物的（抗逆性）密切相關。

　　9. 紙層析實驗中，____________形成固定相，____________流動相。

　　10. 聚丙烯酰胺凝膠是是由 和交聯劑 在催化劑作用下聚合而成的，在具有自

　　由基團體系時，兩者就聚合。引發產生自由基的方法有兩種：（化學法）和（光聚合法）。

　　11. 層析技術按按固定相的使用形式進行分類，可分成以下幾種：（柱層析），（紙層析），（薄層層析）和（薄

　　膜層析）。

　　參考答案：

　　生物化學實驗

　　一、名詞解釋：

　　1、電泳：指帶電粒子在電場中向與其自身所帶電荷相反的電極方向移動的現象。

　　2、同工酶：指催化同一種化學反應，但其酶蛋白本身的分子結構組成卻有所不同的一組酶。

　　3、分配層析法：用物質在兩種或兩種以上不同的混合溶劑中的分配系數不同，而達到分離目的的一種實驗方法。

　　4、酶活性：酶催化化學反應的能力，往往以酶促反應的初速度表示。

　　5、分光光度法：基于溶液對光吸收的大小來確定被測組份的含量的分析方法稱為分光光度法或吸光光度法。

　　6、層析技術：是利用被分離的混合物中各組分的理化性質（分子的形狀和大小、分子極性、吸附力、

　　分子親和力、分配系數等）的不同，使各組分以不同程度在流動相和固定相中進行分配，最終達到分離

　　目的。

　　7、比活力：即每毫克酶蛋白所含酶的活力單位數。比活力高，表示酶純度高。

　　二、填空題：

　　9. 丙烯酰胺單體（Acr），N，N’-甲叉雙丙烯酰胺（Bis）

　　1、簡述4種測定蛋白質含量的方法及其原理。

　　答：(1)考馬斯亮藍G-250染色法：

　　考馬斯亮藍G-250結合蛋白質后，形成藍色CBG-蛋白質結合物，最大光吸收在595nm。在一定的蛋白質濃度范圍內（10-1000ug/ml），CBG-蛋白質結合物的O.D595nm值與蛋白質含量成正比，故可用分光光度法進行蛋白質的定量測定。

　　（2）雙縮脲法：

　　蛋白質含有兩個以上的肽鍵（-CO-NH-）因此，有雙縮脲反應，在堿性溶液中蛋白質與Cu2+形成紫色絡合物，其顏色深淺與蛋白質含量成正比，而與蛋白質的相對分子質量及aa成分無關，故可以用來測定蛋白質含量；

　　（3）Folin-酚試劑法（Lowry法）：

　　是雙縮脲法的發展，第一步涉及到堿性溶液中銅蛋白質復合物的形成，然后這個復合物還原磷鉬酸－磷鎢酸試劑，產生深藍色（鉬藍和鎢藍混合物）比雙縮脲法靈敏，但費時；

　　（4）紫外吸收法：

　　蛋白質中一些氨基酸殘基中的苯環含有共軛雙鍵，所以蛋白質具有吸收紫外光的性質，最大吸收峰在280nm處，在一定范圍內，蛋白質溶液的光吸收值與蛋白質含量成正比，可用作定量測定，簡單、靈敏、快速、不耗樣品，低濃度的鹽類不干擾。

　　（5）微量凱式定氮法：

　　根據蛋白質的平均含氮量為16%，因此，測得1g蛋白氮，相當于6.25g蛋白質。

　　2、簡述不連續聚丙烯酰胺凝膠電泳中的三個不連續及三種物理效應。

　　答：三個不連續：（1）凝膠由上下兩層凝膠組成，兩層凝膠的孔徑不同；

　　（2）緩沖液離子組成及各層凝膠的pH不同；

　　（3）在電場中形成不連續的電位梯度。

　　三種物理效應：（1）電荷效應：酶蛋白按其所帶電荷的種類及數量，在電場作用下向一定的電極以一定的速

　　度泳動。

　　（2）分子篩效應：分子量、形狀不同的分子在經過凝膠孔徑過程中，受到的阻力不同，因此

　　移動速率不等。

　　（3）濃縮效應：使待分離樣品中的各組分在濃縮膠中被壓縮成層，使原來很稀的樣品得到高

　　度的濃縮。

　　3、試分析影響電泳的主要因素有哪些？

　　答：（1）帶電顆粒的大小和形狀：顆粒越大，電泳速度越慢，反之越快；

　　（2）顆粒的電荷數：電荷越少，電泳速度越慢，反之越快；

　　（3）電場強度：電場強度越小，電泳速度越慢，反之越快；

　　（4）溶液的pH值：影響被分離物質的解離度，離等電點越近，電泳速度越慢，反之越快；

　　（5）溶液的粘度：粘度越大，電泳速度越慢，反之越快；

　　（6）離子強度：離子強度越大，電泳速度越慢，反之越快；

　　（7）電滲現象：電場中，液體相對于固體支持物的相對移動；

　　（8）支持物篩孔大小，孔徑越小，電泳速度越慢，反之越快。

　　篇二：生化實驗試題

　　改良Lowry氏法測定蛋白質含量，醋纖膜電泳及凝膠層析分離蛋白質和SDS-PAGE三個實驗屬于蛋白質的內容，琥珀酸脫氫酶的競爭性抑制和檢測谷丙轉氨酶活性屬于酶的部分，觀察激素對家兔血糖濃度的影響涉及信號轉導和糖代謝章節的知識，質粒抽提、核酸電泳及PCR屬于分子生物學的范疇。

　　一、選擇題

　　1．本學期所做的聚丙烯酰胺凝膠電泳實驗主要用來分離（ ）

　　A．核酸B．甘油三酯 C．糖 D．蛋白質

　　2．有關琥珀酸脫氫酶競爭性抑制實驗的論述，錯誤的是（ ）

　　A．抑制劑結構與底物相似 B．抑制劑與酶的活性中心相結合

　　C．抑制劑與酶的結合是可逆的 D．抑制程度只與抑制劑的濃度有關

　　3．某學生用100ul可調微量移液器吸取68ul溶液，應該將此微量移液器刻度調為（

　　A. 068.0 B. 032.0 C. 680.0 D. 006.8

　　4．用Sephadex G-50分離血紅蛋白和DNP-胰糜蛋白酶的層析方法稱( )

　　A．離子交換層析 B．凝膠層析

　　C．親和層析D．高效液相層析

　　5．在瓊脂糖凝膠電泳中，使核酸在紫外透射儀下顯色的是（ ）

　　A．氨基黑B．溴酚藍 C．溴化乙錠 D．考馬斯亮藍

　　6．醋酸纖維素薄膜分離血清蛋白質時，各血清蛋白的泳動速率從小到大依次是（

　　A．α 1，α 2，β，albumin，γ globin B．albumin，α 1，α 2，β，γ globin

　　C．γ globin ，β，α 2，α 1，albumin D．γ globin，β，α 1，α 2，albumin

　　7．有關標準曲線法的描述，錯誤的是 （ ）

　　A．需要配制較多的標準管

　　B．待測管吸光度范圍0.05-1.0 為宜

　　））

　　C．標準管與待測管的測定應在相同條件

　　D．所作標準曲線可供長期使用

　　8．一個基本的PCR反應體系應該包括（）

　　A．模板，DNA-pol II，PCR Buffer，Mg2+，primase，dNTPS，水

　　B．模板，Taq酶，PCR Buffer，Ca2+，primers，dNTPS，去離子水

　　C．模板，DNA-pol II，PCR Buffer，Ca2+，primase，dNTPS，去離子水

　　D．模板，Taq酶，PCR Buffer，Mg2+，primers，dNTPS，去離子水

　　9．對蛋白質定量的方法不包括（ ）

　　A．凱氏定氮法B．改良Lowry氏法

　　C．抽提法 D．紫外吸收

　　10．用分光光度法進行定量分析時，基本計算公式是（ ）

　　A．待測液濃度=（標準液吸光度/待測液吸光度）×標準液濃度

　　B．待測液濃度=（待測液吸光度/標準液吸光度）×標準液濃度

　　二、填空題

　　1．制備聚丙烯酰胺凝膠時催化劑是。

　　2．PCR可在體外對目的基因進行高效、快速、特異的擴增，它的每個循環包括三個步驟，分別是變性___、___退火____、__延伸___。

　　3．琥珀酸脫氫酶競爭性抑制過程中，加入液體石蠟的作用是實驗中使用的抑制劑是丙二酸 。

　　4．ALT或GPT縮寫代表，催化的反應是 。血清中ALT（GPT）活性單位的定義是：每毫升血清在pH7.4，37℃保溫條件下與底物作用30min后，每生成_2.5_μg的丙酮酸為1個谷-丙轉氨酶活性單位。

　　5． 分光光度計使用完畢時，為了延長儀器的使用壽命，滑桿應該放在光源對準_1檔和2檔交界處______休息態__的位置。

　　6．PCR總反應體系的體積是50μl，其中10×buffer加量應為_5__μl。

　　7．酵母核酸定量中，總磷管需要進行反應，將有機磷轉變為需要用的重要試劑是 ，試劑酒精燈加熱反應過程經歷顏色變化為 。

　　8．用離心機離心前，必須將裝有樣品的離心管_配平_______，并_____對稱______放置于離

　　心機的離心平臺上，然后蓋好上蓋，才能開啟電源。

　　9．激素對家兔血糖濃度的影響實驗中，升高血糖的激素是 腎上腺素，降低血糖的激素是 胰島素 。

　　三、判斷題

　　1. 蛋白質在小于等電點的pH溶液中，帶負電，電泳時向正極移動。（ F ）

　　2. Lambert-Beer定律公式為A=KcL，其中K為消光系數，表示物質對光線吸收的能力。（T）

　　3. 酵母核酸提取實驗中，甲苯的作用是使蛋白質變性。（）

　　4. 聚合酶鏈式反應（PCR）必需明確待擴增基因片段的全部序列。（ ）

　　5. 瓊脂糖電泳分離核酸時（pH7.4），核酸樣品應點在負極端。（ T）

　　6. 血糖測定實驗中，兔血經加抗凝劑離心后所得到的上清液是血清。（ F ）

　　四、簡答題

　　1．簡要敘述分光光度計使用方法。

　　開機，調至要使用的波長，預熱20min

　　將待比溶液倒至比色杯中，高度為2/3-4/5，手拿毛面，朝向自己，放入樣品室

　　調至T檔，拉桿拉至0檔（空白管），調節T=100%

　　拉桿拉至1檔，調節T=0

　　調至A檔，拉桿拉至2,3。。。檔，讀取標準液、待測液的吸光度

　　取出后關機

　　2. 簡述改良Mohum法測定谷丙轉氨酶GPT活性實驗中對照管的作用？

　　五、實驗計算題

　　1. 采用鄰甲苯胺法測定血糖濃度。

　　葡萄糖標準液（0.4 mg/ml）取0.5ml，待測血漿取0.1ml。

　　鄰甲苯胺顯色（反應總體積均為7ml）后，620nm波長比色，以空白管調零后讀得：A標 = 0.400；A測 = 0.220

　　請按照上述條件采用標準管法計算待測血漿中血糖的濃度（以mg/100ml為單位）。 C=(0.220/0.1)/(0.400/0.5)*0.4*100=110

　　篇三：生物化學實驗理論考試題答案

　　生物化學實驗理論考試題答案

　　1. 醋酸纖維薄膜電泳時點樣端應靠近電極的哪一端，為什么？

　　答；電泳時點樣端應靠近負極，因為血清中各種蛋白質在PH為8.6的環境中均帶負電，根據同性相吸，異性相斥原理，點樣端在負極時蛋白質向正極泳動從而實現蛋白質分離。

　　2. 用分光光度計測定物質含量時，設置空白對照管的作用,為什么？

　　答；空白對照是為了排除溶劑對吸光度的影響。溶液的吸光度表示物質對光的吸收程度，但是作為溶劑也能吸收，反射和透射一部分的光，因此必須以相同的溶劑設置對照，排除溶劑對吸光度的影響。

　　3. 簡述血清蛋白的醋酸纖維薄膜的電泳原理？

　　答；血清蛋白中各種蛋白質離子在電場力的作用下向著與自身電荷相反的方向涌動，而各種蛋白質等電點不同，且在PH為8.6時所帶電荷不同，分子大小不等，形狀各有差異，所以在同一電泳下永動速度不同從而實現分離。

　　4. 何謂Rf值？影響Rf值的因素？

　　答;Rf是原點到層析中心的距離與原點到溶劑前沿的距離之比。Rf的大小與物質的結構，性質，溶劑系統，層析濾紙的質量和層析溫度有關，對同一種物質來講Rf是一個常量。

　　5. 什么是鹽析？鹽析會引起蛋白質的變性嗎？一般用什么試劑?

　　答;鹽析是指當溶液中的中性鹽持續增加時，蛋白質的溶解度下降，當中性鹽的濃度達到一定程度的時候，蛋白質從溶液中析出的現象。鹽析不會引起蛋白質的變性，因為蛋白質的結構并未發生改變，去掉引起鹽析的因素蛋白質仍能溶解；一般用飽和硫酸銨溶液進行鹽析

　　6. 簡述DNS法測定還原糖濃度的實驗原理？

　　答;還原糖與DNS在堿性條件下加熱被氧化成糖酸，而DNS被還原為棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸。在一定范圍內還原糖的量與3-氨基-5硝基水楊酸顏色的深淺成正比，用分光光度

　　計 測出溶液的吸光度，通過查對標準曲線可計算出3-氨基-5硝基水楊酸的濃度，從而得出還原糖的濃度。

　　7. 影響蛋白質沉淀的因素是什么？沉淀和變性有什么聯系？

　　答;水溶液中的蛋白質分子由于表面形成水化層和雙電層從而形成穩定的親水膠

　　體顆粒，在一定的理化因素影響下蛋白質顆粒因失去電荷和脫水而沉淀。這些因素包括溶液的酸堿度、鹽溶液的濃度、溫度、重金屬離子以及有機溶劑等。變性蛋白質不一定沉淀，沉淀的蛋白質不一定變性。沉淀時蛋白質可能仍然保持天然構像，而變性是蛋白質的高級結構被破壞失去活性。

　　8. 簡述薄層層析法分離糖類的原理/?

　　答;薄層層析的實質就是吸附層析，也就是在鋪有吸附劑的薄層上，經過反復地被吸附劑吸附以及被擴展劑擴展的過程。而吸附劑對不同的物質的吸附力不同，從而使糖在薄層上的涌動速度不同達到分離的目的

　　9. 等電點的定義？蛋白質在等電點時有哪些特點？

　　答;當溶液的PH為一定數值時，其中的蛋白質正負電荷相等，即凈電荷為零，此時的PH值就是該蛋白質等電點。蛋白質在等電點時的溶解度最小。

　　10. 蛋白質顯色黃色反應的原理是什么?反應結果為什么深淺不一？

　　答;含有苯環的氨基酸如酪氨酸和色氨酸，能被硝酸硝化成黃色的物質，而且不同蛋白質中所含的苯環數量不同，造成與試劑反應的程度不同，因此呈現顏色深淺不一 。

　　11. RNA水解后的三大組分是什么？怎樣各自驗證的？

　　答;核糖，磷酸，嘌呤堿。核糖+苔黒酚—Fe（濃HCI）綠色物質；磷酸+鉬酸銨——藍色；嘌呤堿+硝酸銀——白色

　　12. 等電點時為什么蛋白質溶解度最低？

　　答;蛋白質形成膠體二等條件是帶電荷，從而在外表面形成水化膜，導致各膠體顆粒不結合，當PH等于PI時，靜電荷為零，蛋白質分子之間不存在排斥，則聚集沉淀，所以在等電點時溶解度最小。

　　13. 雞蛋清可以用作鉛汞中毒的解毒劑是為什么?

　　答;由于重金屬離子能與蛋白質中帶負電基團如—COOH等作用，生成難溶重金屬的蛋白質鹽，減少機體對重金屬的吸收。

　　14. 血清醋酸纖維薄膜電泳可將血清蛋白依次分為哪幾條帶？哪帶電泳最

　　快？影響電泳速度有哪些？

　　答;有血清蛋白、a1-球蛋白、a2-球蛋白、b-球蛋白、r-球蛋白；其中血清蛋白點用最快。影響因素蛋白質所帶電荷數，分子大小與形狀以及緩沖液濃度。

　　15. 什么是抑制劑？什么是變性劑？區別是什么？

　　答;凡是能使酶活性降低而不使酶失活變性的物質成為抑制劑；凡是能引起蛋白質變性失活的物質叫變性劑。抑制劑只是抑制蛋白質的特性而變性劑則破環蛋白質的結構。

　　16 簡述橘皮中提取果膠原理？

　　答；果膠不溶于乙醇的原來將其沉淀得到果膠。

　　17 離心管如何在天平上平衡？操作離心時應注意什么?

　　答;把放在小燒杯中的離心管（包括蓋子）和管套放在平衡的天平上，用膠頭滴管取離心液調平。注意點：配平、等重的試管放在對稱的位置；啟動時要先蓋好蓋子，停止后才能開蓋；有不正常的聲音時應按STOP鍵,而不是POWER鍵；禁止把小而中的東西放在離心機上以防傷人。

　　篇四：生化實驗題庫

　　生物化學實驗考核試題庫

　　要求：參加考核的每位學生須從1－6號題中隨機抽1題，從7－12號題中隨機抽1題，從13－37號題中隨機抽1題，從38－46號題中隨機抽1題，共計4道考核題進行考核，總分為60分。

　　一、理論考核題

　　1鹽析和鹽溶（3分） 2電泳（3分） 3層析（色譜）（3分） 4酶的活力單位（3分）5比活力（3分） 6分子篩效應（3分） 7電泳的原理（4分）

　　8離子交換層析的原理（4分）9親和層析的原理（4分）

　　10凝膠過濾層析的原理（4分）

　　11吸附層析的原理（4分）

　　12透析技術的基本原理及其應用（4分）

　　13聚丙烯酰胺凝膠電泳的主要優點及用途（6分）

　　14按層析過程的機理，層析法分哪四類？按操作形式不同又分哪三類？（7分） 15普通離心機的使用注意事項？（6分）

　　16可見分光光度計的使用注意事項？（6分）

　　17蛋白質含量測定的常用方法有那些？（6分）

　　18粗脂肪的提取和含量測定的基本原理（6分）

　　19索氏提取器是由哪幾部分組成的？（6分）

　　20粗脂肪的提取和含量測定的簡要操作步驟（6分）

　　21粗脂肪的提取實驗中如何減少誤差？（6分）

　　22凱氏定氮法測定總氮量的基本原理（6分）

　　23凱氏定氮實驗中用到的主要器材有哪些？（6分）

　　24核酸的含量測定常用的方法有哪些？（6分）

　　25雙倒數法測定米氏常數的基本原理（6分）

　　26雙倒數法測定米氏常數的實驗中，決定實驗成敗的因素有哪些？關鍵因素是什么？（7分）

　　27生物細胞的破碎的常用方法有哪些？（6分）

　　28酶的制備及提取過程中常注意哪些事項？（6分）

　　29蛋白質的分離常用的方法有哪些？（6分）

　　30甲醛滴定法測定氨基酸的基本原理（6分）

　　31為什么SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳可以用來測定未知蛋白質的相對分子質量？（6分） 32連續聚丙烯酰胺凝膠電泳與不連續聚丙烯酰胺凝膠電泳有什么不同？（6分） 33聚丙烯酰胺凝膠電泳的優點？（6分）

　　34瓊脂糖凝膠電泳的優點？（6分）

　　35提取某種植物組織中的總DNA時，使用的細胞提取液中的主要試劑成分是什么？各有什么作用？（7分）

　　36如何證明提取到的某種核酸是DNA還是RNA？（6分）

　　37聚丙烯酰胺凝膠電泳分離血清蛋白時，使用的電泳緩沖液PH＝8.3，那么樣品應點在哪端？為什么？（6分）

　　二、技能或實驗操作考核題

　　38說明紙層析和離子交換層析分離氨基酸混合物的方法是根據氨基酸的什么性質? 列出紙層析和柱層析的一般操作步驟。（10分）

　　39凝膠電泳的一般操作步驟（11分）

　　40普通離心機的使用操作（示范）（10分）

　　41可見分光光度計的使用操作（示范）（10分）

　　42如果要105攝氏度干燥某種物質，如何使用干燥箱（示范）? （10分）

　　43要稱取某種藥品2.0g，如何使用天平（示范）？（10分）

　　44要配制500ml 0.01mol/L的NaOH溶液應如何配制？（10分）

　　45配制1L 0.01mol/L的HCl溶液應如何配制（已知濃鹽酸比重是1.19g/L，重量百分比濃度為36.5％）？（11分）

　　46分別配制出10μg/ml，5μg/ml，2μg/ml，1μg/ml的DNA標準溶液，應如何配制？（盡可能節約）（10分）

　　答案：

　　1、鹽析和鹽溶：鹽析：在蛋白質溶液中加入一定量的高濃度中性鹽(如硫酸氨),使蛋白質溶解度降低并沉淀析出的現象稱為鹽析。鹽溶：加入少量中性鹽可增加蛋白質的溶解度,即鹽溶現象。

　　2、電泳：帶電粒子在直流電場中向著 所帶電性相反的電極移動的現象。

　　3、層析（色譜）：用不同物質在不同相態的選擇性分配,以流動相對固定相中的混合物進行洗脫，使混合物各組分以不同速度移動，從而達到分離的一種物理方法。

　　4、酶的活力單位：是指在特定條件下(25℃、最適的pH值和底物濃度),每分鐘可催化1微摩爾(10-6摩爾)底物轉化所需要的酶量。

　　5、比活力：代表酶制劑的純度。根據國際酶學委員會規定比活力用每毫克蛋白所含的酶活力單位數表示。

　　6、分子篩效應：凝膠本身具有三維網狀結構,大的分子在通過這種網狀結構上的孔隙時阻力較大,小分子通過時阻力較小。分子量大小不同的多種成份在通過凝膠床時,按照分子量大小“排隊,凝膠表現分子篩效應。

　　7、電泳的原理：電泳是指帶電顆粒在電場的作用下發生遷移的過程。許多重要的生物分子，如氨基酸、多肽、蛋白質、核苷酸、核酸等都具有可電離基團，它們在某個特定的pH值下可以帶正電或負電，在電場的作用下，這些帶電分子會向著與其所帶電荷極性相反的電極方向移動。電泳技術就是利用在電場的作用下，由于待分離樣品中各種分子帶電性質以及分子本身大小、形狀等性質的差異，使帶電分子產生不同的遷移速度，從而對樣品進行分離、鑒定或提純的技術。

　　8、離子交換層析的原理：離子交換層析法是以具有離子交換性能的物質作固定相,利用它與流動相中的離子能進行可逆的交換性質來分離離子型化合物的一種方法。

　　9、親和層析的原理：親和層析是應用生物高分子與配基可逆結合的原理,將配基通過共價鍵牢固結合于載體上而制得的層析系統。這種可逆結合的作用主要是靠生物高分子對它的配基的空間結構的識別。

　　10、凝膠過濾層析的原理：一種利用帶孔凝膠珠作基質，按照分子大小分離蛋白質或其它分子混合物的層析技術。凝膠過濾層析具有分子篩效應。

　　11、吸附層析的原理：組份在吸附劑表面吸附固定相是固體吸附劑,各能力不同而進行分離的方法。

　　12、透析技術的基本原理及其應用：

　　13、聚丙烯酰胺凝膠電泳的主要優點及用途：①聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺和N，N'甲叉雙丙烯酰胺聚合而成的大分子。凝膠有 格子是帶有酰胺側鏈的碳-碳聚合物，沒有或很少帶有離子的側基，因而電滲作用比較小，不易和樣品相互作用。

　　②由于聚丙烯酰胺凝膠是一種人工合成的物質，在聚合前可調節單體的濃度比，形成 不同程度交鏈結構，其空隙度可在一個較廣的范圍內變化，可以根據要分離物質分子 的大小，選擇合適的凝膠成分，使之既有適宜的空隙度，又有比較好的機械性質。一 般說來，含丙烯酰胺7-7.5%的凝膠，機械性能適用于分離分子量范圍不1萬至100萬物 質，1萬以下的蛋白質則采用含丙烯酰胺15-30%的凝膠，而分子量特別大的可采

　　用含 丙烯酰胺4%的凝膠，大孔膠易碎，小孔膠則難從管中取出，因此當丙烯酰胺的濃度增 加時可以減少雙含丙烯酰胺，以改進凝膠的機械性能。

　　③在一定濃度范圍聚丙烯酰胺對熱穩定。凝膠無色透明，易觀察，可用檢測儀直接測定。

　　④丙烯酰胺是比較純的化合物，可以精制，減少污染。合成聚丙烯酰胺凝膠的原料是丙烯酰胺和甲撐雙丙烯酰胺。丙烯酰胺稱單體，甲撐雙 丙烯酰胺稱交聯劑，在水溶液中，單體和交聯劑通過自由基引發的聚合反應形成凝膠。

　　14、按層析過程的機理，層析法分哪幾類？按操作形式不同又分哪三類？：根據分離的原理不同分類，層析主要可以分為吸附層析、分配層析、凝膠過濾層析、離子交換層析、親和層析等。按操作形式不同又分層析可以分為紙層析、薄層層析和柱層析。

　　15、普通離心機的使用注意事項？：

　　(1).離心機要置水平位置,以保證旋轉軸垂直地球水平面。

　　(2).使用前應檢查套環是否平衡(臺稱)。

　　(3).離心杯及其外套(離心管套)是否平衡(臺稱)。

　　(4).樣品傾入離心杯后應與離心管套一起兩兩平衡，平衡后把它們放置于轉子的對稱位置。

　　(5).蓋好蓋子,打開電源開關,調整離心時間。

　　(6).啟動離心時轉速應由小至大,緩慢升速(一般要2~3min)。

　　(7).達到預定轉速后再調整離心時間至預定時間(10min)。

　　(8).離心完成后要調整調速連桿至零位,同時關上電源。

　　(9).要等到轉速為零時才能打開離心機蓋,取出樣品。

　　16、可見分光光度計的使用注意事項？：（1） 使用過程中比色皿的四個面在槽中保持一定的位置,取用比色皿時手應該捏住四個棱而不能碰到面。比色皿應該避免磨損透光面。

　　（2） 使用過程中不得打開蓋子，保持儀器清潔,為避免溶液灑落對儀器造成的腐蝕，所有溶液的配置、傾倒都不要在儀器附近操作。比色皿放進樣品池之前必須把外表面擦干。

　　（3）當（僅當）操作者錯誤操作或其他干擾引起微機錯誤時，應該立即關斷主機電源，重新啟動，但無須關斷燈源電源。

　　（4）光學器件和儀器運行環境需保護清潔。清潔儀器外表時 ,請勿使用乙醇乙醚等 有機溶劑,請勿在工作中清潔,不使用時請加防塵罩。

　　17、蛋白質含量測定的常用方法有那些？：（1）微量凱式定氮法。（2）雙縮脲法。（3）folin－酚試劑法。（4）紫外分光光度法。（5）考馬斯亮藍染色法。

　　18、粗脂肪的提取和含量測定的基本原理。：脂肪是丙三醇(甘油)和脂肪酸結合成的脂類化合物, 能溶于脂溶性有機溶劑。本實驗用重量法，利用脂肪能溶于脂溶性溶劑這一特性，用脂溶性溶劑將脂肪提取出來，借蒸發除去溶劑后稱量。整個提取過程均在索氏提取器中進行。通常使用的脂溶性溶劑為乙醚或沸點為30oC -60 oC的石油醚。用此法提取的脂溶性物質除脂肪外，還含有游離脂肪酸、磷酸、固醇、芳香油及某些色素等，故稱為“粗脂肪”。

　　19、索氏提取器是由哪幾部分組成的？：提取瓶，提取管和冷凝管三部分組成。

　　20、粗脂肪的提取和含量測定的簡要操作步驟（6分）：1.抽提瓶在105℃±2℃烘箱中烘至恒重，材料干燥至恒重。

　　2.稱取干燥后的材料1-2g,放入研缽中研磨(越細越好)將研磨好的材料用脫脂濾紙包住,用少許脫脂棉擦拭研缽壁上粘的材料及油脂,也一并放入濾紙包. 用棉線拴住濾紙包,將濾紙包放入抽提管，在抽提瓶中加入2/3體積的無水乙醚在70-75℃的水浴上加熱，使乙醚回流，控制乙醚回流次數為每小時約10次，共回流約50次，或檢查抽提管流出的乙醚揮發后不留

　　下油跡為抽提終點。

　　3 取出試樣，仍用原提取器回收乙醚直至抽提瓶全部吸完，擦凈瓶外壁，將抽提瓶放入105℃±2℃烘箱中烘干至恒重。

　　21、粗脂肪的提取實驗中如何減少誤差？（6分）：（1）材料和提取瓶充分干燥。（2）材料盡可能的不損失。(3)提取充分完全。（4）提取后瓶子還要充分的干燥。

　　22、凱氏定氮法測定總氮量的基本原理（6分）：樣品與濃硫酸共熱,含氮有機物即分解產生氨,氨又與硫酸作用變成硫氨.經強堿堿化使之分解放出氨,借蒸汽將氨蒸至酸液中,根據此酸液 被中和的程度可計算得樣品氮的含量.以甘氨酸為例:

　　1.有機物中的氮在強熱和CuSO4，濃H2SO4 作用下，消化生成（NH4）2SO4

　　反應式為： H2SO4==SO2+H2O+[O]

　　R. CH.COOH+[O]==R.CO.COOH+NH3

　　NH3

　　R.CO.COOH+[O]==nCO2+mH2O

　　2NH3+H2SO4==(NH4)2SO4

　　2.在凱氏定氮器中與堿作用，通過蒸餾釋放出NH3 ，收集于 H3BO3 溶液中。

　　反應式為:2NH4++OH-==NH3+H2O

　　NH3+H3BO3==NH4++H2BO3-

　　3. 再用已知濃度的HCI標準溶液滴定，根據HCI消耗的量計算出氮的含量，然

　　后乘以相應的換算因子，既得蛋白質的含量。

　　23、凱氏定氮實驗中用到的主要器材有哪些？（6分）：凱氏燒瓶 ，容量瓶

　　凱氏定氮裝置移液管 酸式滴定管 分析天平 電爐 烘箱

　　24、核酸的含量測定常用的方法有哪些？（6分）（1）紫外分光光度法；

　　（2）定磷法：鉬藍比色法

　　（3）定糖法：

　　RNA+鹽酸——糠醛+地衣酚——Ａ670，鮮綠色；

　　DNA+二苯胺——Ａ595,藍色化合物

　　（4）瓊脂糖凝膠電泳法

　　25、雙倒數法測定米氏常數的基本原理（6分）： Lineweaver和Burk將米氏方程改寫成倒數形式：

　　26、雙倒數法測定米氏常數的實驗中，決定實驗成敗的因素有哪些？關鍵因素是什么？（7分）

　　27、生物細胞的破碎的常用方法有哪些？6分）：機械法：研磨，高速搗碎機；物理法：反復凍溶，超聲波破碎，壓榨法；化學雨生物化學法：自溶，溶脹法，酶解法，有機溶劑處理。

　　28、酶的制備及提取過程中常注意哪些事項？（6分）：

　　29、蛋白質的分離常用的方法有哪些？（6分）：1、前處理：選擇適當的破碎細胞的方法破碎細胞，組織細胞破碎后，選擇適當的介質（一般用緩沖液）把所要的蛋白質提取出來。2、粗分離：當蛋白質混合物提取液獲得后，選用一套適當的方法，將所要的蛋白質與其他雜蛋白質分離開來。一般這一步的分級用鹽析、等電點沉淀和有機溶劑分級分離等方法。這種方法的特點是簡便、處理量大，既能除去大量雜質，又能濃縮蛋白質溶液。

　　3、細分離：也就是樣品的進一步提純，一般使用層析法，包括凝膠過濾層析，離子交換層析，吸附層析以及親和層析等。必要時還可以選擇電泳法。

　　30、甲醛滴定法測定氨基酸的基本原理（6分）：

　　31、為什么SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳可以用來測定未知蛋白質的相對分子質量？（6分）：在聚丙烯酰胺凝膠系統中，加入一定量的十二烷基硫酸鈉（SDS），形成蛋白質－SDS復合物，這種復合物由于結合了大量的SDS，使蛋白質喪失了原有的電荷狀態，形成了僅保持原有分子大小為特征的負離子團塊，從而降低或消除了各種蛋白質分子之間的天然的電荷差異，此時，蛋白質分子的電泳遷移率主要取決于它的分子量大小，而其它因素對電泳遷移率的影響幾乎可以忽略不計。當蛋白質的分子量在15000～200000之間時，電泳遷移率與分子量的對數值呈直線關系，符合下列方程：

　　㏒10Mr = －b·mR + K

　　32、連續聚丙烯酰胺凝膠電泳與不連續聚丙烯酰胺凝膠電泳有什么不同？（6分）：不連續聚丙烯酰胺凝膠電泳包含了兩種以上的緩沖液成分、pH值和凝膠孔徑，而且在電泳過程中形成的電位梯度亦不均勻。由此產生的濃縮效應、電荷效應和分子篩效應。

　　33、聚丙烯酰胺凝膠電泳的優點？（6分）：①聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺和N，N'甲叉雙丙烯酰胺聚合而成的大分子。凝膠有 格子是帶有酰胺側鏈的碳-碳聚合物，沒有或很少帶有離子的側基，因而電滲作用比較小，不易和樣品相互作用。

　　②由于聚丙烯酰胺凝膠是一種人工合成的物質，在聚合前可調節單體的濃度比，形成 不同程度交鏈結構，其空隙度可在一個較廣的范圍內變化，可以根據要分離物質分子 的大小，選擇合適的凝膠成分，使之既有適宜的空隙度，又有比較好的機械性質。一 般說來，含丙烯酰胺7-7.5%的凝膠，機械性能適用于分離分子量范圍不1萬至100萬物 質，1萬以下的蛋白質則采用含丙烯酰胺15-30%的凝膠，而分子量特別大的可采用含 丙烯酰胺4%的凝膠，大孔膠易碎，小孔膠則難從管中取出，因此當丙烯酰胺的濃度增 加時可以減少雙含丙烯酰胺，以改進凝膠的機械性能。

　　③在一定濃度范圍聚丙烯酰胺對熱穩定。凝膠無色透明，易觀察，可用檢測儀直接測定。 ④丙烯酰胺是比較純的化合物，可以精制，減少污染。合成聚丙烯酰胺凝膠的原料是丙烯酰胺和甲撐雙丙烯酰胺。丙烯酰胺稱單體，甲撐雙 丙烯酰胺稱交聯劑，在水溶液中，單體和交聯劑通過自由基引發的聚合反應形成凝 膠。

　　34、瓊脂糖凝膠電泳的優點？（6分）：（1）瓊脂含液體量 大，可達98-99%，近似自由電泳，但是樣品的擴散度比自由電泳小，對蛋白質的吸附 極微。（2）瓊脂作為支持體有均勻，區帶整齊，分辨率高，重復性好等優點。（3） 電泳速度快。（4）透明而不吸收紫外線，可以直接用紫外檢測儀作定量測定。（5） 區帶易染色，樣品易回收，有利于制止備。然而瓊脂中有較多硫酸根，電滲作用大。 瓊脂糖是從瓊脂中提取出來的，是由半乳糖和3.6-脫水-L- 半乳糖相互結合的鏈狀多 糖。含硫酸根比瓊脂少，因而分離效果明顯提高。瓊脂（糖）電泳常用緩沖液的pH在6-9之間，離子強度為0.02-0.05。離子強度過 高時，會有大量電流通過凝膠，因而產生熱量，使凝膠的水份量蒸發，析出鹽的結 晶，甚至可使凝膠斷裂，

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